非洲猪瘟检测荧光定量PCR仪操作步骤

发布时间2019-03-14        浏览次数：7950

    莱普特非洲猪瘟检测荧光定量PCR仪可用于临床实验室中利用荧光聚合酶链反应方法对不同基因进行拷贝数的定量分析。多可配置3个荧光检测通道，标配16孔的检测通量，可通过内置触屏完成所有实验操作与结果分析。小巧的机身设计，可选配外接电池等特点，体积小，重量轻，易于携带，轻松满足外出实验的需求。功能强大，可用于相对定量，定量，熔解曲线，阴阳性分析等。内置7寸高清电容屏PDA，触屏操作，简便快捷。16x0.2ml反应模块，兼容八连排管和单管。可选配外接电池，满足野外环境下进行实验的需求。可充分满足用户对于小通量实验以及外出实验的各种需求简洁直观的软件引导，轻松开启荧光定量PCR实验。
    非洲猪瘟检测荧光定量PCR仪操作步骤：
    1、病毒DNA的提取（使用A盒）
    （1）待检样品、阳性对照和阴性对照的份数总和用n表示，取n个灭菌的1.5 mL离心管，逐管编号。
    （2）每管加入BufferA500mL。
    （3）每管分别加入已处理的待检样品、阳性对照、阴性对照各200mL，充分混匀，室温放置10分钟。
    （4）取与上述离心管等量的DNase-Free吸附柱和收集管，编号。将离心管中的溶液转移至DNase-Free吸附柱，（为避免堵塞吸附柱，尽量不要吸悬浮杂质）。
    （5）用TH-15高速离心机设置13000 r/min室温离心30秒。
    （6）弃去收集管液体，将吸附柱放回收集管中。
    （7）吸附柱内加入600 μL Buffer B，13000 r/min离心30秒。
    （8）弃去收集管液体，将吸附柱放回收集管中。
    （9）重复步骤（7），（8）。
    （10）13000 r/min空柱离心2分钟，去除残留液。
    （11）将每个吸附柱分别移入新的1.5mL离心管中，向柱中央加入50μL Buffer C，室温静置1分钟，13000 r/min离心30秒，离心管中液体即为模板DNA。获得的DNA溶液，冰上保存备用（注意提取的DNA须在2h内进行PCR扩增，若需长期保存须放置-80℃冰箱，但应避免反复冻融）。
    2、荧光PCR扩增（使用B盒）
    （1）从试剂盒中取出荧光PCR反应液、Taq酶，室温融化后，2 000 r/min离心5秒。设所需PCR管数为n（n = 样本数+1管阴性对照+1管阳性对照），每个测试反应体系需要20 μL 荧光PCR反应液和0.5 μL Taq酶。计算好各试剂的使用量，加入一适当体积小管中，充分混合均匀后，向每个PCR管中各分装20μL。
    （2）分别向上述PCR管中加入（11）中制备的DNA溶液各5μL，盖紧管盖，500 r/min 离心30秒。
    （3）将加样后的PCR管放入荧光PCR检测仪内，作好标记。反应参数设置：
    di一阶段，预变性95℃/3分钟
    第二阶段，95℃/15秒，52℃/10秒，60℃/35秒共45个循环。荧光收集在第二阶段每次循环的60℃延伸时进行。